检测抗YO的PCD：建立在CDR2L蛋白上的CBA方法
副肿瘤神经综合征（paraneoplastic neurological syndrome，PNS）是肿瘤通过诱发异常自身免疫等远隔效应导致神经系统受累的疾病。抗神经抗体，特别是抗小脑浦肯野细胞抗原的抗体，是自身免疫性小脑共济失调（ACA）重要的诊断标志物，目前已经报告约30种[1-3]，且不断有新抗体被发现和鉴定。抗小脑浦肯野细胞抗体的检测主要采用基于细胞的检测法（cell based assay，CBA）与基于组织的检测法（tissue based assay，TBA），部分抗体亦可采用免疫印迹膜条法检测。
--2024年<自身免疫性小脑共济失调诊断专家共识>
抗Yo抗体相关副肿瘤小脑退化（PCD）是最为常见副肿瘤性小脑共济失调；患者多数合并乳腺癌或女性生殖系统肿瘤，临床表现为纯小脑综合征；小脑变性相关蛋白2样蛋白（cerebellar degeneration related2 like）CDR2L是抗Yo抗体的主要靶抗原[4]。
但早在2015年，研究者们认为抗Yo抗体的主要靶抗原还是（cerebellar degeneration⁃related2）CDR2蛋白[3]。
A. IHC显示CDR2在人小脑中的表达
B.从ACA患者到小鼠小脑组织切片的抗Yo（PCA-1）结合
直到2021年，实验证明：CDR2L-CBA是重要的PCD诊断标志物[5]。
确认Yo抗体的最佳方法是大鼠小脑切片中Purkinje神经元的免疫荧光染色（TBA），本项研究使用大鼠小脑切片染色作为确认测试。
研究得到以下两个结果：
1. 商业化的免疫印记法假阳性可能较高
在24名患者中，根据商业线免疫测定，所有Yo抗体呈阳性，但只有6人患有PCD。
6名PCD患者的Yo阳性血清在Purkinje神经元中显示出颗粒状的细胞质染色（图1A）。在18例未经证实的PCD病例中，来自2名患者（7名和8名）的血清样本对Purkinje神经元进行了染色，但没有颗粒状细胞质染色；因此，这些患者被解释为抗Yo阴性（图1B）。其余16个血清样本呈阴性（图1C）。
（A）确诊的副肿瘤性小脑变性（PCD）病例（CDR2L+/CDR2+，患者1-6）的血清,显示Purkinje神经元的颗粒状细胞质染色。
（B）2例没有PCD但以前检测到的癌症（CDR2L−/CDR2+，患者7和8）的血清染色了Purkinje神经元的细胞质，但没有观察到颗粒染色。
（C）其余无PCD和无癌症病例的血清（CDR2L−/CDR2+，患者9-13）不会染色大鼠小脑切片的Purkinje神经元。G=颗粒层；M=分子层；P=Purkinje神经元层。
商业线性的免疫印迹法产生了大量假阳性结果（67%-75%）。这意味着，仅使用线性免疫印迹测定的常规测试必须谨慎进行，并且必须进行确认，以防止误诊、不必要的测试和不正确的治疗。
2.Yo抗体的主要靶抗原不是CDR2，而是CDR2L
即使免疫印迹法与CDR2-CBA相结合，假阳性率也很高（29%）。
1）表达Myc-DDK标记的CDR2L的人类胚胎肾293细胞中，CDR2抗体和CDR2L之间没有交叉反应性
上排：用抗CDR2L（绿色）和抗DDK（红色）染色的细胞。
下排：用抗CDR2（无反应）和抗DDK（红色）染色的细胞。
2）PCD的确诊与CDR2L阳性一致，而不是CDR2阳性一致。
6例确诊的PCD病例的样本对CDR2L转染细胞和CDR2的商业CBA染色（图3，A.a和A.b）；7名CBACDR2阳性染色但没有PCD的患者的样本，没有显示CDR2L的CBA染色（图3，B.a和B.b）。
这些结果通过重组CDR2（62kDa）和CDR2L（55kDa）蛋白的Westernblot分析得到证实（图3，A.c和B.c）
A. a患者血清（1:100）敷育CDR2L和CDR2双阳性人胚肾293细胞
B. a CDR2单阳性的人胚肾293细胞
以上的结论，在2023年的新研究中得到再次验证[6]：
使用CDR2L细胞为基础的检测（CBA）作为一种筛查技术，可以提高Yo PCD诊断的准确性。
研究中，Yo PCD患者的48份血清样本在CDR2L-CBA阳性。15名非Yo PCD患者（图1b）、22名无神经系统综合征的卵巢癌患者（图1c）和50名健康献血者的CDR2L-CBA均为阴性。
只有Yo阳性血清与基于细胞的小脑退变相关蛋白2样（CDR2L）分析（CBA）反应。
（a）血清来自Yo阳性患者（绿色），强染色myc-DDK-CDR2L转染的HEK293细胞。覆盖层为黄色。
（b）无Yo抗体的代表性副肿瘤性小脑变性（PCD）患者血清，未染色myc-DDK-CDR2L转染细胞（红色）
（c）卵巢癌代表性患者的血清，未染色myc-DDK-CDR2L转染细胞（红色）。用DAPI（蓝色）显示细胞核。
综上所述，小脑变性相关蛋白2样蛋白CDR2L是抗Yo抗体的主要靶抗原，是重要的PCD诊断标志物。使用CDR2L细胞为基础的检测（CBA）作为一种筛查技术，可以提高Yo PCD诊断的准确性。建议采用商品化或者标准化的CBA与免疫印迹膜条法试剂盒进行检测。
2024年<自身免疫性小脑共济失调诊断专家共识>