再谈TBA，是锦上添花，还是雪中送炭？
01
TBA方法介绍
TBA是采用组织为基质进行检测的抗体检测方法。
常采用动物的脑组织（如猴/大鼠小脑、海马等）切片作为抗原底物。脑组织（啮齿动物或灵长类动物）中包含所有天然靶抗原，检测样本中的抗体会与脑组织切片进行抗原-抗体反应。
TBA实验过程包括：
使用厚度为几微米的动物组织切片（例如小鼠、大鼠或猴子的脑切片），切片经过化学固定和预处理，以减少非特异性结合。这些切片暴露于稀释的患者血清样本后，再用与荧光团或非荧光团缀合的抗人二抗进行标记（Jarius 和 Wildemann，2013）。
TBA检测方法对于神经免疫性疾病的筛查，具有重要作用。
▼ 有助于新生物标记物的发现——锦上添花：
TBA有助于诊断自身免疫性神经综合征，特别是对未知抗体和抗原的患者。2004 lancet报道，在视神经脊髓炎患者的血清样本中，通过与小脑组织冷冻切片发现了微血管系统、Virchow-Robin 间隙和软脑膜附近的结构的独特结合，后面发现了NMOSD的特异性生物标志物AQP4 水通道蛋白。
小鼠脊髓和小脑皮质
A： 双重免疫荧光染色：脊髓微血管内皮结合兔 IgG 特异性因子 VIII（红色）。 NMO-IgG（绿色）在内皮细胞外部结合 (400)。
B：小脑颗粒层和白质中的微血管轮廓，用兔抗层粘连蛋白 IgG（顶部，红色）、NMO-IgG（中间，绿色）和两种抗体一起染色（底部，黄色）（400）。
▼ 整体筛查，减少漏检——雪中送炭：
2019年Mult Scler Relat Disord，从793名患者中采集脑脊液样本，通过免疫荧光试验测量自身抗体水平。先做TBA，有150个阳性，再用CBA验证，有76个CBA可以新确定；从检测数据来倒推，如果先做CBA可以确定184个，另有42个CBA无法识别但TBA可以发现。
在未识别的神经元抗体中，两个是细胞表面抗体，三个是细胞表面和细胞质抗体，三个是细胞质抗体，四个是核和细胞质抗体。
综上所述，TBA的方法可以用于新生物标记物的发现，以提高检测效率，锦上添花；其次在临床尤其怀疑免疫性问题但已知抗体阴性的情况下，可整体筛查，减少漏检，雪中送炭。临床使用上，一般需要CBA 和TBA 联合筛查，筛查结果既可以互相支持，也可做互相补充。
02
TBA的报告解读
TBA可用于多数神经元抗体的检测，包括脱髓鞘、脑炎和副肿瘤抗体等。
脑炎相关抗体的筛查，一般使用啮齿类或灵长类小脑或海马组织切片，这两种切片结果优劣目前还有争议。
小脑图：
缩写代表：
CB-ML：小脑分子层；
PC：浦肯野细胞；
CB-GL：小脑颗粒层；
WM：白质。
小脑包含三种细胞：
1）星形细胞：小脑皮质分子层浅层的细胞，负责大脑的动态平衡或维持稳定状态。
2）浦肯野细胞：小脑皮质中最大的神经元。
3）少突胶质细胞：形成在中枢神经系统中包绕轴突、形成绝缘的髓鞘结构
海马图：
缩写代表：
SLM：层间隙分子；
DG-ML：齿状回分子层；
DGC：齿状颗粒细胞
一些特异性抗体具有特定的染色模式：
★ GFAP脑脊髓炎：小脑分子层，具有径向图案（箭头）。
★ NMDAR 脑炎：小脑颗粒层，较低的点状反应性；海马齿状回分子层，表现出均匀的反应性。
★ GLUK2 脑炎：小脑颗粒层中均表现出强烈的点状反应性；海马分子层内层的强烈反应性；
另外，还有一些抗体会有类似的染色模式，如：
ANNA-1，它对所有 CNS 和 PNS 神经元（包括肌间神经丛）的细胞核和核周细胞质进行染色，但不对核仁进行染色 (A)；
PCA-1，显示大多数大型 CNS 和 PNS 神经元，非细胞核，而是核周细胞质染色，包括小脑和肌间神经丛的浦肯野细胞 (B)；
CRMP-5，表现出脑实质的弥漫性突触染色和肠神经元件的显着染色（C）；
PCA-2，显示浦肯野细胞及其树突染色（D）。
如果TBA结果出现特异性染色，则可以通过已报道的染色模式，推荐特异性抗体进行CBA确诊验证。
03
TBA的局限
TBA筛查出的潜在抗原，可以通过质谱或使用单克隆抗体进行共定位来鉴定。虽然TBA方法用处很大，但也要合理使用，客观评估结果。
但TBA具有局限性：
▼ 主观性：结果是依赖于观察者的，因此是主观的。这可能出现问题的，因为某些抗体的染色模式是类似的，比如来自非 NMO 患者甚至健康对照的稀有血清可能显示出模仿 NMO-IgG/AQP4-Ab 的结合模式，例如抗内皮抗体。
▼ 敏感性较CBA低：独立研究发现TBA测定的灵敏度远低于下述某些CBA测定。
比如：迄今为止，已有 19 项研究评估了TBA测定 ，14 项研究报告了独立但相似的结果。该检测对基于患有 NMO 或 MS 以外疾病的对照以及对诊断的特异性为 93.33%–100%（中位数 100%），但NMO 样本的敏感性为 37.5%–95%（中位数 61.11%）。
▼ 半定量或定性：只能获得半定量结果（通过血清滴定），并且最终滴度又取决于观察者。
因此，临床使用过程中，还可能存在CBA 结果和 TBA 不一致的情况：
综上所述，TBA不适合单独使用检测，单独使用 TBA 的缺点是：1）伴随的抗体（例如抗核抗体）可能会掩盖免疫组织化学染色模式；2）一些抗体不适合TBA，导致敏感性不够，比如GlyR、VGCC等。
总而言之，TBA的方法可以用于新生物标记物的发现，其次是整体筛查，减少漏检。临床使用上，最好 CBA 和TBA 联合筛查，筛查结果既可以互相支持，也可做互相补充。TBA联合检测，详细可查看“珠联璧合-TBA与其他特异性检测方法联合（https://mp.weixin.qq.com/s?__biz=MzI4ODYxNDU5OA==&mid=2247487550&idx=1&sn=4b6f481aa0fe36843945e74282fce446&chksm=ec3ae197db4d68816c68e451051691d817ede60f6301f3711266664932be9ae3b7de0c48ae7a&token=913899375&lang=zh_CN#rd）”。